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              腦膜炎奈瑟菌W135群(NM- W135)核酸檢測試劑盒操作步驟

              發布時間:2021-10-27   點擊次數:59次

              腦膜炎奈瑟菌W135群(NM- W135)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)標準操作步驟:


              1.液氮充分研磨樣品。


              2.收集研磨成粉末的50mg樣品,置于1.5ml離心管中。


              3.加入350μl65℃預熱的緩沖液IL,并加入20μl蛋白酶K劇烈地漩渦振蕩,確保所有的組織團都分散均勻。


              4.65℃水浴20-30min。水浴期間顛倒樣品數次。


              5.加入350μl氯仿,充分混勻,12,000 rpm(~13,400×g)離心5分鐘。


              6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml離心管中。注意確保不要打散沉淀團或把組織碎片也一起轉移。


              7.加入4μl RNase A,渦旋混勻。室溫放置2min。


              8.加入二分之一上清體積的緩沖液IB與等體積的無水乙醇,充分混勻。如:向300μl上清中加入150μl緩沖液IB與300μl無水乙醇。


              9.把上述混勻的液體轉移到吸附柱上。10,000×g離心1 min以結合DNA,棄去濾出液體。純化柱*容量為750μl,如果混合液大于750μl,請分兩次過柱。


              10.將吸附柱重新套回收集管中,加入500μl緩沖液WB至柱子中,10,000×g離心1min,倒棄流出液;


              11.將吸附柱重新套回收集管中,加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中,10,000×g離心1min,倒棄流出液;


              注意:DNA Wash Buffer使用前須按要求用無水乙醇稀釋。如果放入冰箱中,使用前須恢復到室溫。


              12.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中,8,000×g離心1min,棄去流出液;


              13.將吸附柱重新套回2ml收集管中,轉速(>13000×g)離心空結合柱1min以干燥柱子的基質;這一步對下面的洗脫步驟至關重要。


              14.將柱子置于1.5ml滅菌離心管,加入50-150μl65℃預熱的洗脫緩沖液EB至柱子的膜中央。室溫靜置5min;

              15. 室溫下,離心(>13000)1min,以洗脫DNA。保留含DNA的流出液。將DNA儲于-20℃。

              產品僅用于科研如非指出,所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。

              小型豬腎細胞;MPK

              小鼠髖動脈內皮細胞;PIEC

              豬胚胎睪丸傳代細胞;ST

              豬腎傳代細胞;IBRS-2

              豬腎細胞;PK-15

              豬靜脈血管內皮細胞;ZYM-SVEC01

              豬小腸上皮細胞;ZYM-DIEC02

              小耳豬腎細胞;SEPfk

              小耳豬肺細胞;SEP-L1

              小耳豬肺細胞;SEP-L2

              家豬皮膚細胞;SSC-S1

              小香豬皮膚細胞;SSC-S2

              長白山豬胚胎皮膚成纖維樣細胞;201184

              貂源細胞

              鼬肺上皮細胞;MV-1-Lu

              水貂肺上皮細胞;Mv.1.Lu(NBL-7)

              水貂肺上皮細胞;Mv.1.Lu(NBL-7)

              牛源細胞

              新生牛眼晶體上皮細胞;NBLE

              新生牛眼Tenon's囊成纖維細胞;NBTF

              牛腎細胞;MDBK

              牛腎細胞;MDBK(NBL-1)

              牛陀螺狀細胞;BT

              牛胚氣管細胞;EBTr (NBL-4)

              牛腎細胞;MDBK

              牛腎細胞;MDBK(BVDV-free)

              牛腎細胞;MDBK

              大額牛腎細胞;BFR-K1

              大額牛肺細胞;BFR-L1

              大額牛皮膚細胞;BFR-S3

              黃牛皮膚細胞;BTA-S2

              瘤牛皮膚細胞;BIN-S1


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