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              大鼠胎兒表皮角質形成層細胞培養

              大鼠胎兒表皮角質形成層細胞培養

              產品時間:2020-07-22

              訪問量:158

              廠商性質:經銷商

              生產地址:進口、國產

              簡要描述:
              保存和應用:客戶可以根據自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮原代細胞,客戶收到大鼠視網膜色素上皮細胞培養后應立即將其放入CO2細胞培養箱內靜置后2-3h,再進行后續的實驗操作。
              品牌其他品牌CAS詳見說明書
              分子式詳見說明書純度詳見說明書
              分子量詳見說明書貨號GOY-Y3460
              規格5×105/瓶供貨周期現貨
              主要用途公司產品僅用于科研應用領域化工

              以下是訂購信息:

              產品名稱英文名稱貨號
               大鼠胎兒表皮角質形成層細胞培養 Rat Embryo: Normal Fetal Epidermal Keratinocytes GOY-Y3460

              大鼠胎兒表皮角質形成層細胞【Rat Embryo: Normal Fetal Epidermal Keratinocytes
                   產品描述:公司提供的原代細胞均來自新鮮組織,公司提供的大鼠原代細胞均來自新鮮組織,用于培養該細胞的組織采集是根據標準方案進行。細胞的培養采用公司PrimaCellTM原代細胞培養試劑盒來優化目的細胞生長條件,以降低雜細胞的污染,同時保證質量的穩定。在公司生物技術部標準的操作流程下,原代細胞可以保持分化狀態,進而可以用于評估體外藥物模型系統和調節特定基因的遺傳功能。產品僅供科研
               冷凍保存細胞之方法?
              冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
              冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

               

              培養操作:
              1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜(或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養基,培養過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
              2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養。      
              1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
              2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。  
              3. 按 6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養液后吹勻。
              4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。
              3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
              1. 細胞凍存時,棄去培養基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養基終止消化,可使用血球計數板計數。
              2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據細胞數量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
              3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
              細胞培養操作規程:
              一.培養基及培養凍存條件準備:
              1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清,10%。
              2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
              3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
              二.細胞處理:
              1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
              2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
              對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
              方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
              下列是公司正在促銷產品:

              小鼠血清總補體(CH50)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Methyltestosterone  中文名:甲基睪酮  分子式:C20H30O2  度:98.0%

              小鼠血清淀粉樣蛋白elisa試劑盒   小鼠血清淀粉樣蛋白試劑盒   規格型號:96T/48T   小鼠血清淀粉樣蛋白試劑盒,規格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進口分裝),產品別名:小鼠血清淀粉樣蛋白試劑盒、小鼠血清淀粉樣蛋白elisa試劑盒   保存條件:2-8   保質期:6個月。     Metronidazole  443-48-1  中文名:甲硝唑  分子式:C6H9N3O3 

              小鼠血清淀粉樣蛋白A(SAA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           Minisecolide C  1967030-77-8  中文名:  分子式:C28H34O7 

              小鼠血清淀粉樣蛋白(mouse SAA)   作用:   ELISA   規格:   48T/96T   進口分裝     Gliquidone  33342-05-1  中文名:格列喹酮  分子式:C27H33N3O6S 

              小鼠血清(NO)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Minisecolide C  1967030-77-8  中文名:  分子式:C28H34O7  度:關鍵詞:

              小鼠補體C5a(mouse C5a)   作用:   ELISA   規格:   48T/96T   進口分裝     Benzo-15-crown 5-ether  中文名:苯并-15-5-  分子式:C14H20O5 

              小鼠補體C3a(mouse C3a)   作用:   ELISA   規格:   48T/96T   進口分裝  Benzo-15-crown 5-ether  中文名:苯并-15-5-  分子式:C14H20O5  度:98.0%

              小鼠補體1抑制物抗體(C1INH)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Chrysophanol 8-O-glucoside  13241-28-6  中文名:  分子式:C21H20O9  度:97.5%  關鍵詞:  抗血小板; 抗凝; 大黃屬; 鼠李屬; 酸模屬; 蒽醌苷; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫

              小鼠病毒(MVMELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Losartan  114798-26-4  中文名:氯沙坦  分子式:C22H23ClN6O  度:98.0%  關鍵詞: 

              小鼠表皮調節素elisa試劑盒   小鼠表皮調節素試劑盒   規格型號:96T/48T   小鼠表皮調節素試劑盒,規格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進口分裝),產品別名:小鼠表皮調節素試劑盒、小鼠表皮調節素eisa試劑盒   保存條件:2-8   保質期:6個月。  Lamivudine  134678-17-4  中文名:拉米夫定  分子式:3O3S  度:98.0%  關鍵詞:

              兔白介素17(IL-17)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  4-Benzoyloxy-2-azetidinone  28562-58-5  中文名:4-苯甲酰氧基-2-氮雜環丁酮  分子式:C10H9NO3  度:98.0%   

              兔白介素-12(rabbit IL-12)   作用:   ELISA   規格:   48T/96T   進口分裝     4-Benzyl N-carbobenzoxy-L-aspartate  中文名:N-芐氧羰基-L-天冬氨酸-4-芐脂  分子式:C19H19NO6 

              兔白介素-10(rabbit IL-10)   作用:   ELISA   規格:   48T/96T   進口分裝  4-Benzyl N-carbobenzoxy-L-aspartate  中文名:N-芐氧羰基-L-天冬氨酸-4-芐脂  分子式:C19H19NO6  度:98.0%

              兔白介素1IL-1ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  4-Benzyl N-(tert-butoxycarbonyl)-L-aspartate  中文名:N-(叔丁氧羰基)-L-天冬氨酸-4-芐酯  分子式:C16H21NO6  度:98.0%

              兔阿霉素(ADR)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           4-Benzyl N-(tert-butoxycarbonyl)-L-aspartate  中文名:N-(叔丁氧羰基)-L-天冬氨酸-4-芐酯  分子式:C16H21NO6

              Tenacissoside H  191729-45-0  中文名:通關藤苷分子式:C42H66O14  度:98.0%  關鍵詞:  通光散; 孕甾烷; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫  小鼠氧化酶(DAO)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

              Tenacissoside G  191729-43-8  中文名:通關藤苷分子式:C42H64O14  度:%  關鍵詞:  通光散; 通關藤; 孕甾烷; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫  小鼠乙酰膽堿受體抗體(AChRab)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

              Tenacissoside F  928151-78-4  中文名:通關藤苷分子式:C35H56O12  度:關鍵詞:  通關藤; 孕甾烷; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫  小鼠乙酰膽堿(ACH)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

              Tenacigenoside A  920502-42-7  中文名:  分子式:C35H56O12  度:關鍵詞:  孕甾烷; 甾苷; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫  小鼠胰高血糖素樣肽1(GLP-1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

              Tenacigenin B  80508-42-5  中文名:  分子式:C21H32O5  度:關鍵詞:  通光散; 孕甾烷; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫  小鼠胰高血糖素(GCELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

              實驗報告:

              大鼠胎兒表皮角質形成層細胞培養一、分離與培養:
                  1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,后將組織剪成1mm3左右大??;
                  2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
                  3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織完全被消化;
                  4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
                  5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
              二、免疫熒光鑒定:
                  1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
                  2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
                  3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
                  4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
                  5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
                  6、用PBS沖洗3次,每次10min,后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

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